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總膽固醇(TC)含量檢測(cè)試劑盒

總膽固醇（TC）含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
英文名稱(chēng)：Total cholesterol (TC) content test kit
關(guān)鍵詞:總膽固醇|總膽固醇含量檢測(cè)|TC|TC含量檢測(cè)
貨號(hào)：BC1980
規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
總膽固醇（Total Cholesterol，TC）是指所有脂蛋白所含膽固醇的總和，包括游離膽固醇和膽固醇酯。
利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇（FC）和游離脂肪酸（FFA），從而把膽固醇酯轉(zhuǎn)化為 FC；進(jìn)一步利用膽固醇氧化酶催化 FC 氧化，生成△4-膽甾烯酮和 H2O2；后利用過(guò)氧化物酶催化H2O2 氧化 4-氨基安替比林和酚，生成紅色醌類(lèi)化合物，其在 500nm 有特征吸收峰，其顏色深淺與TC 含量成正比。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、天平、低溫臺(tái)式離心機(jī)、1mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、EP 管、蒸餾水、異丙醇。

產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：異丙醇 50mL×1 瓶，自備，4℃保存；
試劑一：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 400μL×1 支，4℃保存；
試劑三：液體 60μL×1 支，4℃保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1支，10mg膽固醇，4℃保存。臨用前加入517μL提取液，振蕩溶解，即為50μmol/mL的膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液。
工作液的配制：將試劑一：試劑二：試劑三按比例3mL：20μL：3μL配制工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

操作步驟：
一、樣本處理：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。10000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 2 秒，間隔 3 秒，總時(shí)間 3min）；然后 10000g，4℃離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清（漿）樣品：直接測(cè)定。
二、測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng) 500nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將 50μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液用提取液稀釋為 1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
3、 操作表：(在 1.5ml 離心管中依次加入下列試劑)
測(cè)定管   標(biāo)準(zhǔn)管   空白管
樣品（µL）         100       -         -
標(biāo)準(zhǔn)溶液（μL）     -       100        -
提取液（μL）      -        -        100
工作液（µL）     900      900       900
充分混勻，37℃靜置 15min，反應(yīng)完成后于 1mL 玻璃比色皿，測(cè)定 500nm 處吸
光值 A，分別記為 A 測(cè)定管、A 標(biāo)準(zhǔn)管和 A 空白管，△A=A 測(cè)定管-A 空白管，△A 標(biāo)
準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管，空白管只需測(cè)一次。

總膽固醇含量計(jì)算
一、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制：
以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為 x 軸，其對(duì)應(yīng)的△A 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b，將△A 帶入方程得到 x（μmol/mL）
二、總膽固醇含量的計(jì)算：
1. 血清（漿）中 FC 含量計(jì)算：
TC 含量（μmol/dL）=x×100。
2. 組織中 FC 含量計(jì)算：
(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算
TC 含量（μmol/mg prot）=x×V 提取÷（Cpr×V 提?。?x÷Cpr。
(2) 按樣本鮮重計(jì)算
TC 含量（μmol/g 鮮重）=x×V 提取÷W= x÷W
3. 細(xì)胞、細(xì)菌中 TC 含量計(jì)算：
TC 含量(μmol/104cell)=x×V 提取÷500=0.002x。
100：1dL=100mL；V 提?。杭尤霕颖镜奶崛∫后w積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；500:500 萬(wàn)個(gè)細(xì)胞數(shù)量。

注意事項(xiàng)
當(dāng)△A 大于 1 時(shí)，建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

相關(guān)文獻(xiàn)：
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